Myeloid-derived Suppressor Cell (MDSC) アイソレーションキット
Overview このMyeloid-Derived Suppressor Cell Isolation Kitは、リンパ組織のGr-1highLy-6G+ および Gr-1dimLy-6G–ミエロイド細胞の分離のために開発されました。 Details Background information Myeloid-derived suppressor cells (ミエロイド由来サプレッサー細胞、MDSCs) は、強力なT細胞機能障害誘導活性を持つ未成熟な骨髄性細胞の不均一な細胞集団で、その表現型はCD11b+Gr-1+として知られています。MDSCsは種々の病的な状態（ガン、感染、自己免疫疾患)において増加しますが、これは、それらの状態において未成熟なミエロイド系前駆細胞の、顆粒球、マクロファージ、樹状細胞への分化が部分的に阻害され、その結果として、この未成熟な集団が増殖して数を増やしたものです。 Gr-1dimLy-6G–細胞は、Ly-6Cマーカーの発現に基づいてさらにGr-1dimLy-6ChighLy-6G–細胞とGr-1dimLy-6ClowLy-6G–細胞へと分けることが出来ます。Ly-6ChighとLy-6Clow亜集団の存在率は、サンプルの腫瘍モデルによって異なります。 Detailed separation procedure Myeloid-Derived Suppressor Cell Isolation Kitは、リンパ組織のGr-1highLy-6G+ および Gr-1dimLy-6G–ミエロイド細胞の分離のために開発されました。 まず、細胞懸濁液をAnti-Ly-6G-Biotin抗体とAnti-Biotin MicroBeadsとともにインキュベーションします。細胞をMACS Columnにかけることにより、磁気標識されたGr-1highLy-6G+細胞をカラムに保持します。標識されていない細胞はフロースルーに回収されますが、この画分にはGr-1dimLy-6G– ミエロイド細胞が含まれます。磁気標識されたGr-1highLy-6G+細胞は、ポジティブフラクションに溶出され、これを2本目のMACS Columnにかけることによってさらに純度を高めることができます。 ステップ2では、濃縮したGr-1dimLy-6G– 集団の純度をさらに高めます。このために細胞をAnti-Gr-1-Biotin 抗体とStreptavidin MicroBeadsで磁気標識し、2本のMACS Columnsを用いてポジティブセレクションを行い、Gr-1dimLy-6G–細胞を分離します。 Downstream applications このキットで分離したMDSCsは、実験動物モデルにおいて、T細胞の活性化やエフェクター機能に対する影響をみるなどの機能解析に使用することができます。分離したMDSCsは、表現型解析や遺伝子発現プロファイリングなどにも適しています。 Columns ステップ１の磁気分離: LS 又は autoMACS Columns ステップ2の磁気分離: MS 又は autoMACS Columns		Figure 1 Myeloid-derived suppressor cells were isolated from a spleen of a BALB/c mouse using the Myeloid-Derived Suppressor Cell Isolation Kit, two LS Columns, two MS Columns, and an appropriate MACS Separator. Cells were fluorescently stained with CD11b-APC and Anti-Gr-1-PE and analyzed by flow cytometry. Cell debris and dead cells were excluded from the analysis based on scatter signals and propidium iodide fluorescence. Spleen cells before separation Enriched Gr-1highLy-6G+ cells Enriched Gr-1dimLy-6G– cells

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