μMACS™ One-step cDNA Labeling Kit
Three steps in one column – mRNA 単離、cDNA ラベリング、cDNA 精製の 3 ステップを MACS® Technology を用いて１カラムで行います。 95 min from sample to microarray hybridization – マイクロアレイのハイブリダイゼーションまで最短95分（蛍光あるいはアイソトープ標識の first-strand cDNA を用いる場合）。 Sensitivity is the key – 極小のマイクロビーズとカラム内操作により、サンプルのロスを最小限に抑えます。 Reproducible cDNA labeling – 簡便な MACS Technology と ready-to-use の試薬は、操作する人による差や操作時間、サンプル調製のばらつきを抑えます。 Innovation in cDNA labeling マイクロアレイによる遺伝子発現解析では、通常、RNA 単離に始まり、cDNA ラベリングとハイブリダイゼーションプローブの精製を引き続いて行います。それぞれのステップを的確に行うことが、高感度で再現性の良い結果を得るために非常に重要です。磁気分離と MACS Technology を用いたカラム内操作により、一つのカラムの中で３ステップを進められるだけでなく、クオリティの高い結果も期待できます。メッセンジャーRNAの単離、処理や精製過程でのサンプルの最小限のロス、そして簡便な操作方法により、感度と再現性が高まります。 MACS Technology for gene expression profiling. 極小の (直径 50 nm) パラマグネティック Oligo(dT) MicroBeads は、polyA+ mRNA を即座に標識し、細胞や組織、または total RNA から直接精製することを可能にします (figure 1)。これらの標識された mRNA 分子は thermoMACS™ Separator の強い磁場のなかに保持されるのに対し、不純物は洗い流されます。ここで、お好きな標識物質 (放射性あるいは蛍光物質) と共に ready-to-use の enzyme mix を加えて、thermoMACS Separator のスイッチを入れ、42 ℃で60分間インキュベーションします。最後の洗浄と RNase H ステップで、反応成分やフリーのヌクレオチド、そして残っていた RNA が除去されます。溶出液には、ピュアな標識済み first-strand cDNA が含まれ、直ぐにマイクロアレイのハイブリダイゼーションに使用することが出来ます。 Consistent cDNA labeling for microarray experiments PIQOR™ Immunology Microarrays, sense を用いたハイブリダイゼーション実験で、μMACS™ mRNA isolation と in-column cDNA labeling の組み合わせが成功することが明らかとなっています。Figure 2 に、Cy3- および Cy5- 標識マウス肝プローブの自己 vs 自己ハイブリダイゼーションのscatter plot を示しています。高い回帰係数 0.994 により、どちらの標識 cDNA もマイクロアレイ上でほぼ同一のシグナルを示すことが実証されました。 Columns μ Columns (キットに含まれる) Further information RNA research brochure [PDF; 2,4 MB] Isolation of mRNA from stablized whole blood [PDF; 111,3 KB] Average RNA yields [PDF; 66 KB]		Figure 1 μMACS One-step cDNA Labeling Figure 2 Scatter plot, self-self hybridization of PIQOR™ Immunology Microarray, sense, with probes generated from 10 mg mouse liver and labeled either with Cy3-dCTP or Cy5-dCTP. The high regression coefficient of 0.994 demonstrates that both labeled cDNAs give nearly identical signals on the microarray. Figure 3 Pearson correlation-coefficient visualizing reproducibility and reliability of one-step cDNA labeling. 10 μg and 100 μg total RNA derived from Molt-4 cells were labeled with Cy3 versus 10 μg and 100 μg total RNA isolated from Raji cells labeled with Cy5. Corresponding samples were hybridized to PIQOR™ Immunology Microarrays, sense, using the a-Hyb™ Hybridization Station.

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