Cell type-specific total RNA
High-quality RNA for gene expression analysis— 定量的 RT-PCR やマイクロアレイに、すぐに使用できる高品質な RNA です 。 Reliable cell-type specific RNA— MACS® Technology により、マイルドな条件下で純度良く分離された細胞を用いて抽出された、信頼できる細胞タイプ特異的なRNAです。 異なるタイプの造血系細胞集団から、高純度のtotal RNA を抽出する際、特に regulatory T cells (CD4+ CD25+) のように希少で免疫学的に重要な細胞集団の場合には、労力とコストがかかります。それぞれの細胞タイプに特異的な total RNA は、種々の造血系細胞集団に由来する高品質な RNA で、遺伝子発現プロファイリング実験や遺伝子クローニングに、あるいは種々の解析のリファレンスとして、そのままお使いいただけます。 High production standards. 細胞分離の常法である MACS® Technology　を用いて、健常人の血液より特定の細胞集団を分離しています。極小の MicroBeads と細胞に優しい MACS Column Technology により、細胞機能や活性化状態に特に影響を与えることなく、細胞集団を分離することが可能です。この特異的細胞集団から、total RNA を抽出しており、残存している genomic DNA を除去した後、RNA の品質管理を行っています。 Ready-to-use total RNA. 多くの血液サンプルをプールしたり、必要な細胞集団を分離したりする必要はありません。この高品質な RNA は ready to use です—定量的 PCR やマイクロアレイ解析のような遺伝子発現プロファイリングのためのサンプルあるいはリファレンスとして使用できます。そのため、種々の細胞タイプにおける遺伝子発現の違いをみることができます。この total RNA をリファレンスとして用いることで、何らかの処理をした培養細胞サンプルや臨床サンプルを、健常な無処理のサンプルと比較することが出来ます。あるいは、この RNA を用いて cDNA 合成や RT-PCR の後に、目的遺伝子をクローニングすることもできます。 Consistent and reliable cell type-specific total RNA • Blood donation 健常で投薬を受けていない18–68才の成人ドナーより、承諾を受けて法規制にのっとり採血しました。ドナーの性別は、女性 50% 男性 50% です。ドナーは、HIV, B 型およびC型肝炎, 梅毒がネガティブです。 • Cell preparation 密度勾配遠心法により、バフィーコートから末梢血単核球 (PBMCs) を調製しました。細胞サブセットは、PBMCs より、それぞれに対応する MicroBeads を用いて、ポジティブセレクションにより磁気分離しました。細胞分離の詳細については、「MACS Technology—Gold standard in cell separation」のパンフレットをご覧ください。細胞の純度は、全ての細胞集団において、90% を超えています。 • RNA preparation and purity 多数のドナーから精製された細胞をプールし、溶解して、シリカメンブレン法を用いて total RNA を抽出しました。genomic DNA を除去後、RNA の純度を Agilent Bioanalyzer を用いたキャピラリー電気泳動によって確認しました。通常、得られる RNA Integrity Number (RIN) values¹,² は、8.5 あるいはそれ以上です。 • Quantitative PCR control Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HPRT) 遺伝子はハウスキーピング遺伝子で、通常1個の細胞当たり1–10 mRNA コピーが発現しています3。そのため、 RNA 品質のリファレンスとして適しています。それぞれの total RNA の 1 ng, 10 ng, 100 ng およびイントロンを挟んだプライマーを用いて定量的 reverse transcription (RT) PCR を行い、HPRT mRNA 量を確認しています。 Further information Total RNA flyer [PDF; 80,6 KB]		Figure 1 Real-time PCR analysis of B cell (CD19+) Total RNA. A: Quantitative RT-PCR with intron-spanning primers for 88 bp Hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase (HPRT) low-copy housekeeping gene (LightCycler®, Roche) B: Melting curve data Figure 2 Real-time PCR analysis of Regulatory T cell (CD4+CD25+) Total RNA. Quantitative RT-PCR with intron-spanning primers for 88 bp Hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase (HPRT) low-copy housekeeping gene (LightCycler®, Roche). Figure 3 Electrophoretic trace of CD3+ Total RNA. 5 µg isolated and lyophilized CD3+ Total RNA was dissolved with 50 µL RNAse-free distilled water and stored at –70 °C. An aliquot of 1 µL was then analyzed using a Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies).

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