CD56+CD8+/CD8- NK Cell アイソレーションキット ( #130-092-659 )

CD56⁺CD8⁺/CD8^- NK Cell アイソレーションキット

Description

CD56⁺CD8⁺/CD8^– NK Isolation Kitは、2種類のNK細胞集団：CD3^–CD56⁺CD8⁺ NK細胞とCD3^–CD56⁺CD8^– NK細胞を続けて分離するために開発されました。
CD56⁺CD8⁺ NK細胞サブセットは、CD8^– のサブセットに比較して、強い細胞傷害活性を持つことが示されています。

Details

Background information
NK細胞は均一な細胞集団ではなく、機能および表現型の違いによって、いくつかのサブセットに分けることができます。健常人では、CD3^–CD56⁺CD8⁺ NK細胞は全PBMCsのおよそ3%、CD3^–CD56⁺CD8^– NK細胞は約4%を占めています。これら2つのNK細胞集団は、２本のα-鎖で構成されたCD8ホモ二量体の存在に違いがあります。CD56⁺CD8⁺ サブセットは、CD8^– サブセットに比較して、強い細胞傷害活性を持つことが示されており¹、NK細胞上のCD8α/αの発現の意義が示唆されています。

Detailed separation procedure
CD56⁺CD8⁺とCD56⁺CD8^– NK細胞の両サブセットの分離は、２ステップで行います。最初にNK以外の細胞、すなわちT細胞, B細胞, 樹状細胞, 幹細胞, 単球, 顆粒球, 赤血球系細胞を、ビオチン標識抗体カクテルとマイクロビーズのカクテルで間接的に磁気標識します。この細胞を MACS^® Column にかけて磁気分離すると、磁気標識されたnon-NK細胞はカラムに保持されるのに対し、非標識のNK細胞は素通りします。ステップ2では、濃縮したNK細胞をCD8 MicroBeadsで直接標識します。その後の磁気分離において、LD Columnを用いて非標識のCD56⁺CD8^– NK細胞を分離するか、あるいはMS Columnを用いて標識されたCD56⁺CD8⁺ NK細胞を分離します。同じサンプルから両方のサブセットを分離する場合には、MS Columnのフロースルー画分を、LD Columnを用いて再度分離します。

Downstream applications
CD56⁺CD8⁺/CD8^– NK Cell Isolation Kitを用いて分離したNK細胞は、サブセットの表現型や機能の解析、レセプター発現、サイトカイン分泌、あるいは自然免疫や獲得免疫に関わる他の細胞との細胞間相互作用の解析のために使用できます。分離したNK細胞は、肝炎ウイルスの感染や癌などの疾病、さらに妊娠中における、これら細胞の役割を研究するためにも使用できます。

Columns

ステップ１の磁気分離（ディプリーション）: LS 又は autoMACS® Columns
ステップ２の磁気分離（CD56⁺CD8⁺ NK 細胞のポジティブセレクション）: MS 又は autoMACS Columns
ステップ２の磁気分離（CD56⁺CD8^- NK 細胞の分離）: LD 又は autoMACS Columns

Figure 1

Both the CD56⁺CD8⁺ and CD56⁺CD8^– NK cell subsets were isolated from human PBMCs using the CD56⁺CD8⁺/CD8^– NK Cell Isolation Kit. Non-NK cells were depleted using an LS Column. The enriched NK cells were magnetically labeled with CD8 MicroBeads, and CD56⁺CD8⁺ NK cells were isolated by positive selection using an MS Column. For isolation of the CD56⁺CD8^–NK cells, the wash and the flow-through fraction of the MS Column were further separated using an LD Column and collected in the flow-through. Cells were fluorescently stained with CD8-PE (clone 3G8) and CD56-APC.

A: PBMCs before separation

B: Pre-enriched NK cells after depletion of non-NK cells

C: Isolated CD56⁺CD8⁺ NK cells

Isolated CD56<sup>+</sup>CD8<sup>+</sup> NK cells

D: Isolated CD56⁺CD8^– NK cells