μMACS™ FactorFinder Kit
Native な転写因子の精製：μMACS™ Technology により未変性の転写因子を精製できます。 DNA 結合性タンパク質の機能的分離：標的 DNA塩基配列に結合するタンパク質を分離します。 90 分のプロトコール：超遠心操作なし。キットには、すぐに使えるバッファーが含まれています。 新規転写因子の検出および標的DNA配列の解析： μMACS FactorFinder Kit を用いて、DNA結合性タンパク質の特異性の高い磁気分離が可能です。このキットのアプリケーションは多様で、種々の転写制御に関する疑問に対応することが出来ます。例えば、タンパク質を分離することにより、個々の転写因子やその補助因子を検出しその特性を解析して、完全なプロファイルを作成することができます。また、DNA-タンパク質相互作用や標的DNA塩基配列が解析できます。さらに、薬のターゲットとしての可能性を持つ転写因子の研究が容易になります。 機能的な転写因子を迅速に分離： 最初の45 分間で、細胞質画分と核画分を含む細胞ライセートをキット付属のバッファーで調製できます。超遠心機を用いた厄介な分画は必要ありません。次の45分間で、目的の未変性の転写因子を磁気的に分離できます。 MACS® Technology を用いた転写因子の分離： ビオチン化標的 DNA と μMACS Streptavidin MicroBeads を細胞ライセートに加えて、標的タンパク質を磁気的に標識します。MACS® Separator という磁石装置にセットした μ Column にその混合液をロードします。非特異的な分子を洗浄バッファーで洗い流します。最後の溶出ステップで、その後の機能解析に適した未変性の転写因子が得られます。あるいは、SDS-PAGEにすぐかけられるように変性状態でタンパク質を溶出します。 一般的なゲルシフトアッセイやELISA法とは対照的に、この新しい μMACS FactorFinder Kit では、転写因子を検出するだけでなく、分離することも可能です。そのため、免疫学、腫瘍学、幹細胞研究におけるシグナル伝達研究を促進することが出来ます。 Columns μ Columns (キット付属)		Figure 1 Working scheme for the isolation of transcription factors. Figure 2 Isolation of phosphorylated STAT-3 (pSTAT-3) from activated T cells. T cells from human PBMCs were activated and expanded in the presence of IL-2 using the T Cell Activation/Expansion Kit. After three days, cells were incubated with IL-15 for 15 min, washed and lysed with Cell Lysis Buffer. Whole cell lysate was incubated with a biotinylated 31 bp DNA probe comprising the STAT-3 binding sequence, μMACS Streptavidin MicroBeads were added, and the magnetic isolation was performed. The transcription factor was eluted with Native Elution Buffer. The Western blot (using a phosphospecific STAT-3 antibody) shows a high amount of pSTAT-3 in the eluate. L: cell lysate; FT: flow-through; W1, W2: wash fractions; E: eluate.

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