CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) マイクロビーズキット

Overview

CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBead Kit は、PBMCsよりplasmacytoid dendritic cells (PDCs) をポジティブセレクションにて分離するために開発されました。
このキットには、FcR Blocking ReagentとCD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBeadsが含まれています。

Details

Background information
CD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1)¹ は、ヒト血液^1-5、骨髄⁶および臍帯血¹¹のplasmacytoid dendritic cells (PDCs)に特異的に発現しています。これらの組織ではCD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1)の発現がPDCsに限局されているため、直接分離することが可能です。血液や骨髄では、CD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1)⁺ PDCsは、CD4⁺, CD45RA⁺, CD303 (BDCA-2)⁺, CD141 (BDCA-3)^dim, CD1c (BDCA-1)⁻, CD2⁻ という表現型を示します。また、リネージマーカー (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) 、CD13やCD33のようなミエロイド系マーカー、CD32, CD64, FcεRI のようなFcレセプターは発現していません。その形質細胞様形態 (fig. 2) とpre-T細胞レセプターα鎖の発現から、PDCsがリンパ球系由来であることが示されます。分離されたばかりのCD1c (BDCA-1)⁺ またはCD141 (BDCA-3)⁺⁺ ミエロイド系血中樹状細胞および単球は、CD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1) を発現していません。しかし、これらミエロイド系血中樹状細胞や単球におけるCD304 (BDCA4/ Neuropilin-1) の発現は、培養することによって誘導されます^1,6。炎症性扁桃腺においては、CD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1) の発現は、PDCs以外の一部の細胞、主にfollicular B helper memory T細胞においても検出されました⁶。CD304 (BDCD-4) は、Neuropilin-1 (NP-1) と同一であることが示されています⁶。
CD304 (BDCA-4)は、neuropilin-1 (NP-1) と同一分子であることが示されました⁶。Neuropilin-1は、ニューロン、内皮細胞および腫瘍細胞を含む多くの非造血系細胞に発現することが以前より知られています。
CD303 (BDCA-2)とは異なり、CD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1)抗原への抗体の結合は、インフルエンザウイルスなどで誘導した後のPDCsにおけるⅠ型 IFN 産生に実質的な影響を与えません (fig. 3)^5,6,14。

Downstream applications
分離したCD304 (BDCA-4/ Neuropilin-1)⁺ PDCsは、例えばToll-like レセプター^4,7,8,12、ケモカインレセプター^3,8,10、またはEMR2⁹ などの新しい抗原の発現の研究や、樹状細胞活性化⁴、遊走³、サイトカイン産生^4,6,8、および T細胞 polarization^4,6,13などの研究に使用されました。また、乾癬性関節炎やリウマチ患者のPBMCsおよび滑液から分離したPDCsの機能および表現型の解析をした例もあります¹⁵。

Columns

ポジティブセレクション: MS, LS, 又は autoMACS® Columns

Figure 1

Isolation of CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1)⁺ plasmacytoid dendritic cells from PBMCs using the CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBead Kit, MS Columns, and a MiniMACS™ Separator. Cells were stained with CD303 (BDCA-2)-FITC and CD123-APC. Like CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1), the CD303 (BDCA-2) antigen is specifically expressed on plasmacytoid dendritic cells in blood, and allows their direct identification. Apart from plasmacytoid dendritic cells, CD123 is also expressed at high levels on basophils and at low levels on monocytes and myeloid dendritic cells.

PBMCs before separation

Enriched CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1)⁺ plasmacytoid blood dendritic cells

Enriched CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1)<sup>+</sup> plasmacytoid blood dendritic cells

Figure 2

Plasmacytoid dendritic cells were isolated from PBMCs by using the CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBead Kit, and May-Grünwald/Giemsa stained.

Figure 3

IFN-α secretion of CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1)⁺ blood dendritic cells. Plasmacytoid dendritic cells were isolated using the CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBead Kit and cultured for 24 hours in the presence of 10 ng/mL IL-3 with and without influenza virus (5 HAU/mL, strain PR8). Secretion of IFN-α was determined by ELISA.^5,6

IFN-α secretion of CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1)<sup>+</sup> blood dendritic cells. Plasmacytoid dendritic cells were isolated using the CD304 (BDCA-4/Neuropilin-1) MicroBead Kit and cultured for 24 hours in the presence of 10 ng/mL IL-3 with and without influenza virus (5 HAU/mL, strain PR8). Secretion of IFN-α was determined by ELISA.<sup>5,6</sup>