MACSelect™ Vectors and Tag Vector Sets ( #130-091-886 #130-091-888 #130-091-889 #130-091-890 #130-091-887 #130-092-085 #130-092-084 #130-092-083 )

MACSelect™ Vectors and Tag Vector Sets

Streamlined protein expression and isolation in mammalian cells - MACS^® Technology によって、形質転換効率が低いとか、タンパク質の量が少ないといった問題を解決することができます。

Surface markers for transfected cells - 形質転換細胞を磁気濃縮するので、抗生物質の使用や時間のかかるセレクションをする必要がありません。

Flexibility - あらゆる哺乳類細胞に使える co-transfection ベクターとクローニングベクターをご用意しております。

MACSelect™ - Transfected Cell Selection System は、形質転換した哺乳類細胞を磁気濃縮することによって、問題となる低い形質転換効率を解決することが出来ます。磁気細胞分離を行うために、MACSelect MicroBeads により特異的に標識できる細胞表面マーカーを、目的遺伝子と共発現させます。pMACS ベクターは MACSelect の細胞表面マーカー CD4, H-2K^k, あるいは LNGFR をコードしており、co-transfection あるいはクローニングに用いることができます。 (MACSelect System の詳しい情報は、MACSelect - Transfected Cell Selection Kits の項をご覧ください)。

哺乳類細胞を用いる場合、低い形質転換効率のほかに、目的タンパク質の発現量の少なさが問題になることがあります。特にタンパク質相互作用の研究のような高精度が要求される分析では、高い特異性とマイルドな条件下での精製が要求されます。組換え蛋白にエピトープタグをつけて発現させることで、µMACS™ Tag Isolation Kit による目的タンパク質の高純度かつ高感度な精製が可能です。これには、 His, c-myc, HA, GST あるいは GFP タグ融合タンパク質に対して特異性の高いモノクローナル抗体を結合させた磁気粒子のMicroBeads を使用します（詳細はµMACS Tag Protein Isolation Kits の項をご覧ください）。形質転換細胞の濃縮とタンパク質の単離を効率的に行うために、 pMACS K^k ベクターには、 His, c-myc, あるいは HA タグ配列をご用意しております。1回のクローニングステップで目的遺伝子を pMACS K^k タグベクターに挿入することで、セレクションマーカーとエピトープタグ付きの目的タンパク質をコードしたプラスミドが得られます。トランスフェクションの後、迅速でマイルドな MACS^® Technology を用いて、陽性細胞を濃縮し、組み換えタンパク質を単離します。

それぞれの MACSelect Vector Set には、N末端あるいは C末端にエピトープタグを付加できるように、2種類の pMACS vectors が含まれています。pMACS K^k.Tag vectors には、c-myc, HA あるいは His タグ配列が含まれており、N末あるいはC末にエピトープタグが付いたタンパク質をCMV プロモーターにより発現させることができます。マウス H-2K^k MACSelect enrichment marker は、H-2K^k プロモーターにより共発現します（Fig. 1 参照)。

通常の MACSelect 用の co-transfection ベクターとクローニングベクターは、MACSelect Kits に入っていますが、個別に購入することも可能です。ベクターマップ、配列、マルチクローニングサイトなどの情報を提供しています。（詳細は、MACSelect - Transfected Cell Selection Kits をご覧ください）。

Disclaimer

CMV promoter は US patent 5,168,062 及び 5,385,839 によって保護されており、研究目的にのみ許可されています。CMV promoter のその他の使用には、以下の所からのライセンスが必要です。The University of Iowa Research Foundation, 214 Technology Innovation Center, Iowa City, IA 52242

Further information

Figure 1

pMACS Tag Vector maps.

pMACS K^k.Tag(N)

pMACS K^k.Tag(C)

Figure 2

Raji cells were electroporated with pMACSK^k HA(C)-CD4 vector and transfected cells were enriched with MACSelect™ K^k MicroBeads. Cell lysates of cells before enrichment (-) and after enrichment (+) were loaded on a SDS-PA gel; with (+) or without (-) prior µMACS HA protein immunopurification. Western blot was performed with Anti-HA-HRP (1:5,000) and chemiluminescent signal detection (ECL™ Western Blotting System, GE Healthcare).

Raji cells were electroporated with pMACSK<sup>k</sup> HA(C)-CD4 vector and transfected cells were enriched with <a href="/jp/PG_166_110_MACSelect_K_k_System.aspx">MACSelect™ K<sup>k</sup> MicroBeads</a>. Cell lysates of cells before enrichment (-) and after enrichment (+) were loaded on a SDS-PA gel; with (+) or without (-) prior <a href="/jp/PG_162_792_Isolation_and_analysis_of_HA_tagged_proteins.aspx">µMACS HA protein immunopurification</a>. Western blot was performed with Anti-HA-HRP (1:5,000) and chemiluminescent signal detection (ECL™ Western Blotting System, GE Healthcare).