Isolation and analysis of His-tagged proteins
Background polyhistidine (His) タグは、６個のヒスチジン残基からなるアミノ酸モチーフで、アフィニティ精製のために組換え型タンパク質の C-末端もしくは N-末端に付加します。 ミルテニーバイオテク社では、高品質な Anti-His モノクローナル抗体を µMACS™ MicroBeads に結合した、His タグ融合タンパク質を分析スケールで特異的に単離するための製品を販売しています。また、組換え型 His タグ融合タンパク質を解析するための、ビオチン、FITC、horseradish peroxidase (HRP) 標識抗体も提供しています。 Isolation and detection of His-tagged proteins His タグ融合タンパク質の分離 µMACS™ Anti-His Isolation Kit は、確立された MACS® Technology に基づいており、高純度な His タグ融合タンパク質の迅速で特異的な分離が可能です。タンパク質分離における MACS Technology の利点は： 特異性 – 高親和性のモノクローナル抗体が MACS MicroBeads に結合しているので、Hisタグ融合タンパク質を特異的に低いバックグラウンドで分離することができます。 高感度 – 極小で (50 nm)、常に浮遊状態の MACS MicroBeads は、反応速度が速く、量の少ないタンパク質でも単離することが可能です。 スピーディ – 高純度の His タグ融合タンパク質が、2時間以内に得られます！ µMACS His Isolation Kit は、手動操作で行う、ロースループットのアプリケーションのために開発されたキットで、µMACS Separator を用いて分離します。 MultiMACS His Isolation Kits を用いれば、MultiMACS 96 Separator を用いた半自動もしくは自動のハイスループット処理（96サンプルまでの並行処理）に、簡単にスケールアップすることが出来ます。 中容量から多量スケールの His タグ融合タンパク質の精製には ProCatch His Resin をお勧めします (fig. 1)。 His タグ融合タンパク質の検出 Anti-His モノクローナル抗体には、種々の標識抗体があります。蛍光 (FITC, PE) 標識 Anti-His 抗体は、例えば蛍光顕微鏡などの免疫蛍光分析に使用できます(fig. 2)。ビオチン標識 Anti-His 抗体は、適当な標識ストレプトアビジンと組み合わせることにより、様々な検出方法に使用することができます。 ウエスタンブロットあるいは ELISA による His タグ融合タンパク質の特異的で高感度な検出には、Anti-His-HRP または Anti-His-HRP (C-term.) が使用できます。Horseradish peroxidase (HRP) を直接結合しているため、 これらの抗体では２次抗体のインキュベーションが不要で、アッセイプロトコールを簡単にすることができます。C-末端に His タグを付加したタンパク質の場合には、Anti-His-HRP (C-term.) は Anti-His-HRP よりも、高い感度と特異性を示します。Anti-His-HRP は、His タグがN-末端に付加されたタンパク質も、C-末端に付加されたタンパク質も検出できます。 Antibody specificatins ターゲット配列: His エピトープ (HHHHHH) アイソタイプ Anti-His antibody: mouse IgG2b アイソタイプ Anti-His antibody (C-terminal): mouse IgG1 Columns µMACS™ Isolation Kit には: µ Column, 試料量が多い場合には M Column MultiMACS™ Isolation Kits には: Multi-8 又は Multi-96 Columns Further information Protein research brochure.pdf [PDF; 850,1 KB]		Figure 1 Purification of a 30 kDa histidine-tagged protein from prokaryotic cell lysate with ProCatch His Resin. Marker (lane 1), lysate from bacterial extract (2), the flow-through (3), and the eluate (4) were separated by SDS-PAGE and Coomassie stained. Figure 2 Intracellular labeling and FACS analysis of mPD1-His expressing CHO cells. CHO cells were transiently transfected with a mPD1-His encoding vector and analysed by flow cytometry. CHO cells were fixed, permeabilized and labeled with Anti-His-FITC (B) or Mouse IgG1-FITC isotype control (A), respectively. A B

サイト内検索

高度な検索