Isolation and analysis of HA-tagged proteins
Background インフルエンザウイルス由来の hemagglutinin (HA)-エピトープ (YPYDVPDYA) は、哺乳類の組換え型タンパク質発現の融合タグとして、近年よく使用されています。 ミルテニーバイオテク社では、高品質な Anti-HA モノクローナル抗体を µMACS™ MicroBeads に結合した、HA タグ融合タンパク質を特異的に単離するための製品を販売しています。また、組換え型 HA タグ融合タンパク質を解析するための、ビオチン、FITC、PE、horseradish peroxidase (HRP) 標識抗体も提供しています。 Isolation and detection of HA-tagged proteins HA 融合タンパク質の分離 µMACS™ Anti-HA Isolation Kit は、確立された MACS® Technology に基づいており、高純度の HA タグ融合タンパク質の迅速で特異的な分離が可能です(fig. 1)。タンパク質分離における MACS Technology の利点は： 特異性 – 高親和性のモノクローナル抗体が MACS MicroBeads に結合しているので、HA タグ融合タンパク質を特異的に低いバックグラウンドで分離することができます。 高感度 – 極小で (50 nm)、常に浮遊状態の MACS MicroBeads は、反応速度が速く、量の少ないタンパク質でも単離することが可能です。 スピーディ – 高純度の HA タグ融合タンパク質が、2時間以内に得られます！ µMACS HA Isolation Kit は、手動操作で行う、ロースループットのアプリケーションのために開発されたキットで、µMACS Separator を用いて分離します。 MultiMACS HA Isolation Kits を用いれば、MultiMACS 96 Separator を用いた半自動もしくは自動のハイスループット処理（96サンプルまでの並行処理）に、簡単にスケールアップすることが出来ます。 HA 融合タンパク質の検出 高品質な Anti-HA モノクローナル抗体が、種々の標識でご利用いただけます。 蛍光(FITC, PE) 標識 Anti-HA 抗体は、例えば蛍光顕微鏡などの免疫蛍光分析に使用できます(fig. 2)。Anti-HA-HRP 抗体は、ウエスタンブロットあるいは ELISA による HA タグ融合タンパク質の特異的で高感度な検出のために作成されました。Horseradish peroxidase (HRP) を直接結合した Anti-HA-HRP 抗体を使用すると、２次抗体のインキュベーションが不要なので、プロトコールを簡単にすることができます。 ビオチン標識 Anti-HA 抗体は、適当な標識ストレプトアビジンと組み合わせることにより、様々な検出方法に使用することができます。 Antibody specifications ターゲット配列: YPYDVPDYA 由来: influenca virus hemagglutinin アイソタイプ: mouse IgG1 Columns µMACS™ Isolation Kit には: µ Column, 試料量が多い場合には M Column MultiMACS™ Isolation Kits には: Multi-8 又は Multi-96 Columns Further information Protein research brochure.pdf [PDF; 850,1 KB]		Figure 1 Sensitive isolation of recombinant fusion protein with μMACS™ Anti-HA MicroBeads. 107 mouse pre-B cells (1881) were transfected with a vector encoding HA-BDCA-2 and proteins isolation was performed using cell populations with either 1% (lane 1, 3) or 10% (2, 4) positively transfected cells. Whole-cell lysates (1, 2) or 20% of the eluate from a protein isolation with Anti-HA MicroBeads (3, 4) were separated by SDS-PAGE, blotted on a membrane and detected by using Anti-HA-HRP. Figure 2 Immunofluorescence analysis of HA-BDCA-2 expressing RBL-1 cells. RBL-1 (rat basophilic leukemia) cells were transiently transfected with a vector encoding HA-BDCA-2 and analysed by confocal fluorescence microscopy after 24 hours of expression. Cells were first labeled with CD303(BDCA-2)-Biotin, fixed, permeabilized, and then stained with Anti-HA-FITC and Streptavidin-Alexa633. A Fluorescent confocal image of transfected RBL-1 cells. B Overlay of transmission image and fluorescent confocal image of transfected RBL-1 cells. A B

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