Isolation and analysis of c-myc-tagged proteins
Background c-myc ペプチド (EQKLISEEDL) は、広範囲なヒトの癌に過剰発現しているヒト c-myc 癌原遺伝子に由来します。哺乳類組換えタンパク質の発現系において、よく用いられる融合タグです。 ミルテニーバイオテク社では、高品質な Anti-c-myc モノクローナル抗体を µMACS™ MicroBeads に結合した、c-myc タグ融合タンパク質を特異的に単離するための製品を販売しています。また、組換え型 c-myc タグ融合タンパク質を解析するための、ビオチン、FITC、horseradish peroxidase (HRP) 標識抗体も提供しています。 Isolation and detection of c-myc-tagged proteins c-myc 融合タンパク質の分離 µMACS™ Anti-c-myc Isolation Kit は、確立された MACS® Technology に基づいており、c-myc タグ融合タンパク質の迅速で特異的な分離が可能です(fig. 1)。タンパク質分離における MACS Technology の利点は： 特異性 – 高親和性のモノクローナル抗体が MACS MicroBeads に結合しているので、c-myc タグ融合タンパク質を特異的に低いバックグラウンドで分離することができます。 高感度 – 極小で (50 nm)、常に浮遊状態の MACS MicroBeads は、反応速度が速く、量の少ないタンパク質でも単離することが可能です。 スピーディ – 高純度の c-myc タグ融合タンパク質が、2時間以内に得られます！ µMACS c-myc Isolation Kit は、手動操作で行う、ロースループットのアプリケーションのために開発されたキットで、µMACS Separator を用いて分離します。 MultiMACS c-myc Isolation Kits を用いれば、MultiMACS 96 Separator を用いた半自動もしくは自動のハイスループット処理（96サンプルまでの並行処理）に、簡単にスケールアップすることが出来ます。 c-myc 融合タンパク質の検出 Anti-c-myc モノクローナル抗体は、種々の標識でご利用いただけます： FITC 標識 Anti-c-myc 抗体は、例えば蛍光顕微鏡などの免疫蛍光分析に使用できます(fig. 2)。Horseradish peroxidase (HRP) を直接結合した Anti-c-myc-HRP 抗体を使用すると、２次抗体のインキュベーションが不要なので、プロトコールを簡単にすることができます。Anti-c-myc-HRP 抗体は、ウエスタンブロットあるいは ELISA による c-myc タグ融合タンパク質の特異的で高感度な検出のために作成されました(fig. 3)。ビオチン標識 Anti-c-myc 抗体は、適当な標識ストレプトアビジンと組み合わせることにより、様々な検出方法に使用することができます。 Antibody Specifications ターゲット配列: EQKLISEEDL 由来: ヒト c-myc 癌原遺伝子 アイソタイプ: mouse IgG1 Columns µMACS™ Isolation Kit には: µ Column, 試料量が多い場合には M Column MultiMACS™ Isolation Kits には: Multi-8 又は Multi-96 Columns Further information Protein isolation flyer.pdf [PDF; 814,4 KB]		Figure 1 Specific isolation of recombinant fusion protein with μMACS™ Anti-c-myc MicroBeads. Cells were transfected with a vector encoding c-myc-BDCA-2 and in vivo labeled with 35S-methionine. The purification of recombinant c-myc-BDCA-2 protein was performed using Anti-c-myc MicroBeads and, as a negative control, Anti-HA MicroBeads. The figure shows an autoradiogram after SDS-PAGE. Figure 2 Immunofluorescence analysis of c-myc-BDCA-2 expressing CHO cells. CHO cells were transiently transfected with a vector encoding c-myc-BDCA-2 and analysed by fluorescence microscopy after 24 hours of expression. A Detection with Anti-c-myc-FITC and CD303 (BDCA-2)-Biotin/Anti-Biotin-Alexa 546. B Detection with Anti-c-myc-Biotin/Anti-Biotin-Alexa 546 and CD303 (BDCA-2)-FITC; red: Alexa 546-labeling, green: FITC-labeling, yellow: FITC-Alexa 546 double-labeling. A B Figure 3 Sensitive detection of recombinant fusion protein with Anti-c-myc-HRP antibody. 293 HEK cells were transfected with a vector encoding c-myc-BDCA-2. 5×106 cells were lysed and recombinant protein c-myc-BDCA-2 was purified using the μMACS™ Anti-c-myc Isolation Kit. 1/100, 1/500, and 1/1000 of the eluate was separated by SDS-PAGE, blotted on a PVDF membrane and detected using Anti-c-myc-HRP (1:10,000, 1 h, room temperature) and ECL reagents (GE Healthcare).

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